Clonagem de genes em bactérias

24 Abril 2023, 10:45 • Maria Luísa Lopes de Castro e Brito

Apresentação das etapas envolvidas numa estratégia de clonagem; hospedeiros de clonagem; vectores de clonagem: características gerais. Plasmídeos: pUC18 (a-complementação) e pBR322 (genes de resistência a dois antibióticos).

Métodos de transferência de genes em células microbianas:

- transformação e electroporação; competência natural e provocada, eficiência de transformação.

- transdução; ciclo lítico e ciclo lisogénico; utilização de bacteriófagos como vectores de clonagem.

- conjugação triparental; plasmídeos conjugativos (genes tra) e plasmídeos mobilizáveis (genes mob).

Selecção e Rastreio de recombinantes:

- Definições.

- Métodos de selecção e de rastreio: utilização de antibióticos;  inactivação por inserção;

complementação de mutações específicas.