Programa

Métodos Moleculares de Diagnóstico

Mestrado Bolonha em Engenharia Alimentar

Programa

UD1 – Métodos clássicos (fenotípicos) 1. Apresentação da disciplina. 2. Métodos de detecção e identificação.Técnicas de isolamento e detecção. 3. Avaliação da resistência a biocidas. 4. Sistema Biolog. 5. Técnicas imuno-enzimáticas. 6. Avaliação do potencial virulento. UD2 – Métodos moleculares A – TÉCNICAS GERAIS DE BIOLOGIA MOLECULAR Isolamento e purificação de ácidos nucleicos. Determinação da concentração de DNA. Separação de fragmentos de DNA por electroforese B – TÉCNICAS MOLECULARES DE DIAGNÓSTICO. 1. Métodos baseados em PCR. A reacção em cadeia da polimerase (PCR). Princípios da técnica. Optimização da reacção (parâmetros críticos). O PCR como um instrumento de detecção e identificação de patogénios. Selecção de iniciadores específicos.O PCR como ferramenta taxonómica. 2. Variantes. Princípios da técnica. Selecção dos iniciadores. Vantagens e limitações. Aplicações. RAPDs. Multiplex PCR. rep-PCR. PCR-RFLP. ARDRA. 3. Métodos baseados na utilização de enzimas de restrição. Enzimas de elevada frequência de corte e enzimas de baixa frequência de corte. REA,RFLP. AFLP, Electroforese em campo pulsado. 4. Método baseados na hibridação de DNA. Sondas de DNA. Southern blot, ribotipagem. Colony blot, dot blot (slot blot). 5. Sequenciação de DNA. Método de Sanger.Sequenciação manual e sequenciação automática. Estratégias de sequenciação. 6. Sondas de PNA. Princípios da técnica.Selecção das sequências.Aplicações. UD3 – Taxonomia numérica Aplicação de métodos de análise numérica aos resultados da tipagem. Aplicação do programa NTSYS na análise de caracteres fenotípicos e genotípicos.Utilização do BLAST na comparação de sequências e avaliação da relação entre organismos.