Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas

27 Outubro 2021, 13:30 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral

Fatores que influenciam a eficiência da transformação por ATMT nos fungos; Formas de confirmar que a transformação foi bem-sucedida; Análise por Southern para identificar o tipo e frequência de eventos de integração de T-DNA em transformados; Exemplos da utilização da técnica. Técnicas moleculares para identificar a região do genoma do fungo onde ocorreu a inserção aleatória do T-DNA; Vantagens, limitações e aplicação de ATMT em fungos;

Aula prática (continuação): Preparação do fungo; Co-cultivo bactéria/fungo e seleção dos fungos transformados.

Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas

26 Outubro 2021, 14:30 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral

Introdução: Explicação sobre o processo de transformação mediado pela Agrobacterium tumefaciens em plantas com foco no plasmídeo Ti, e no processo de produção e transferência do T-DNA desde célula bacteriana até ao núcleo da célula vegetal e a consequente formação dos tumores bacterianos. Utilização da técnica ATMT para a transformação de fungos. Explicação do protocolo de transformação.

Aula pratica: Preparação das células de Agrobacterium para a transformação do fungo.

Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas

26 Outubro 2021, 11:00 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral

Introdução: Explicação sobre o processo de transformação mediado pela Agrobacterium tumefaciens em plantas com foco no plasmídeo Ti, e no processo de produção e transferência do T-DNA desde célula bactéria até ao núcleo da célula vegetal e a consequente formação dos tumores bacterianos. Utilização da técnica ATMT para a transformação de fungos. Explicação do protocolo de transformação.

Aula pratica: Preparação das células de Agrobacterium para a transformação do fungo.

Citogenómica - Hibridização in situ fluorescente

20 Outubro 2021, 16:15 • Maria Manuela Antunes Gomes da Silva

Hibridização in situ fluorescente (FISH) para o mapeamento e estudo da organização de sequências.

Fundamentos e procedimento experimental. Metodologias de marcação e detecção de sondas. Principais utilizações da técnica. Microscopia de fluorescência. Analise de imagem – software ImageJ.

Procedimento prático:

Realização de FISH em células de centeio para a avaliação do efeito de stress de temperatura na organização de sequências repetitivas, através do estudo comparativo de núcleos interfásicos de plântulas tratadas e controlo. Avaliação dos resultados obtidos por quantificação de imagem utilizando o software ImageJ.

Citogenómica - Hibridização in situ fluorescente

20 Outubro 2021, 13:30 • Maria Manuela Antunes Gomes da Silva

Hibridização in situ fluorescente (FISH) para o mapeamento e estudo da organização de sequências.

Fundamentos e procedimento experimental. Metodologias de marcação e detecção de sondas. Principais utilizações da técnica. Microscopia de fluorescência. Analise de imagem – software ImageJ.

Procedimento prático:

Realização de FISH em células de centeio para a avaliação do efeito de stress de temperatura na organização de sequências repetitivas, através do estudo comparativo de núcleos interfásicos de plântulas tratadas e controlo. Avaliação dos resultados obtidos por quantificação de imagem utilizando o software ImageJ.