Sumários
Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas
12 Outubro 2023, 16:30 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral
Realização do protocolo de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens de Colletotrichum:
- Preparação
das células de Agrobacterium: multiplicação da bactéria em meio rico, em meio mínimo e em meio indutor de virulência;
- Preparação da suspensão de esporos do fungo;
- Co-cultivo bactéria/fungo em meio indutor de virulência ;
- Cultura do fungo transformados em meio seletivo.
Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas
12 Outubro 2023, 13:30 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral
Realização do protocolo de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens de Colletotrichum:
- Preparação
das células de Agrobacterium: multiplicação da bactéria em meio rico, em meio mínimo e em meio indutor de virulência;
- Preparação da suspensão de esporos do fungo;
- Co-cultivo bactéria/fungo em meio indutor de virulência ;
- Cultura do fungo transformados em meio seletivo.
Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas
10 Outubro 2023, 13:30 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral
Realização do protocolo de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens de Colletotrichum:
- Preparação
das células de Agrobacterium: multiplicação da bactéria em meio rico, em meio mínimo e em meio indutor de virulência;
- Preparação da suspensão de esporos do fungo;
- Co-cultivo bactéria/fungo em meio indutor de virulência ;
- Cultura do fungo transformados em meio seletivo.
Transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens em eucariotas
9 Outubro 2023, 15:45 • Ana Cristina Garcia Pereira Cabral
Explicação do processo de transformação mediado pela Agrobacterium tumefaciens em plantas com foco no plasmídeo Ti, e no processo de produção e transferência do T-DNA desde célula bacteriana até ao núcleo da célula vegetal e a consequente formação dos tumores bacterianos.
• Explicação do protocolo de transformação;
• Fatores que influenciam a eficiência da transformação;
• Formas de confirmar que a transformação foi bem-sucedida;
• Análise por “Southern Blot” para identificar o tipo e frequência de eventos de integração de T-DNA nos transformados;
• Técnicas moleculares para identificar a região do genoma do fungo onde ocorreu a inserção aleatória do T-DNA (TAIL PCR e PCR Inverso);
• Vantagens, limitações e aplicação de ATMT em fungos.