Disciplina Curricular
Métodos Moleculares de Diagnóstico MMDiag
Mestrado Bolonha em Biologia dos Recursos Vegetais - MBRV 2017-2018
Peso
6.0 (para cálculo da média)
Objectivos
1. Contribuir para o desenvolvimento da investigação na área do diagnóstico e áreas afins. 2. Proporcionar uma aprendizagem de diferentes métodos /técnicas de diagnóstico, começando pelos métodos quimiotaxonómicos, passando aos métodos imunoenzimáticos e e acabando nas recentes técnicas baseadas na tecnologia do DNA. 3. Conhecer as vantagens e as limitações apresentadas pelas diferentes técnicas, bem como os respectivos níveis de sensibilidade, especificidade e principais aplicações.
Programa
UD1 – Métodos clássicos (fenotípicos) 1. Apresentação da disciplina. 2. Métodos de detecção e identificação.Técnicas de isolamento e detecção. 3. Avaliação da resistência a biocidas. 4. Sistema Biolog. 5. Técnicas imuno-enzimáticas. 6. Avaliação do potencial virulento. UD2 – Métodos moleculares A – TÉCNICAS GERAIS DE BIOLOGIA MOLECULAR Isolamento e purificação de ácidos nucleicos. Determinação da concentração de DNA. Separação de fragmentos de DNA por electroforese B – TÉCNICAS MOLECULARES DE DIAGNÓSTICO. 1. Métodos baseados em PCR. A reacção em cadeia da polimerase (PCR). Princípios da técnica. Optimização da reacção (parâmetros críticos). O PCR como um instrumento de detecção e identificação de patogénios. Selecção de iniciadores específicos.O PCR como ferramenta taxonómica. 2. Variantes. Princípios da técnica. Selecção dos iniciadores. Vantagens e limitações. Aplicações. RAPDs. Multiplex PCR. rep-PCR. PCR-RFLP. ARDRA. 3. Métodos baseados na utilização de enzimas de restrição. Enzimas de elevada frequência de corte e enzimas de baixa frequência de corte. REA,RFLP. AFLP, Electroforese em campo pulsado. 4. Método baseados na hibridação de DNA. Sondas de DNA. Southern blot, ribotipagem. Colony blot, dot blot (slot blot). 5. Sequenciação de DNA. Método de Sanger.Sequenciação manual e sequenciação automática. Estratégias de sequenciação. 6. Sondas de PNA. Princípios da técnica.Selecção das sequências.Aplicações. UD3 – Taxonomia numérica Aplicação de métodos de análise numérica aos resultados da tipagem. Aplicação do programa NTSYS na análise de caracteres fenotípicos e genotípicos.Utilização do BLAST na comparação de sequências e avaliação da relação entre organismos.
Métodos de ensino e avaliação
1. Obtenção de frequência.
Máximo 5 faltas. Entregue o Caderno de Práticas.
2. Avaliação.
2.1. Avaliação contínua.
Os vinte valores correspondentes à cotação total são distribuídos do modo seguinte: .
a) 25% para o caderno de práticas.; .
b) 25% para um seminário apresentado pelo aluno; .
c)50 % para a classificação obtida em 3 testes..
2.2. Exame final.
O exame final consta de uma prova escrita que versará sobre toda a matéria da respectiva disciplina.